手性分析很關(guān)鍵的一項是流動相的選擇，手性分析一般都采用正相，使用zui多的流動相是正己烷、正庚烷、乙醇和異丙醇這四種，其中起洗脫作用的流動相是乙醇和異丙醇，正己烷和正庚烷用來調(diào)節(jié)流動相的洗脫強度。

　　做手性分析時一般選用兩只柱子：AD-H和IC，基本上這兩只柱子可以解決遇到的所有的手性化合物，AD-H是早期我們一直在使用的，后來的IC可以使用更多的溶劑從而提供了更多的選擇性，但是習(xí)慣先用AD-H做手性分析方法開發(fā)，手性分析基本上都用恒流來做，溶劑一般也都是提前混合好再放到儀器上用，主要是因為正相溶劑在儀器上混合效果不好。

　　如前邊所述，一般情況下拿到一個樣品，首先選擇的是用正己烷和乙醇做流動相，根據(jù)化合物分子結(jié)構(gòu)式來判斷其極性的大小，進(jìn)而來選擇流動相的比例，極性大的選擇使用的乙醇比例大一點，極性小的選擇使用的乙醇比例小一點，乙醇比例一般是從大到小，根據(jù)分離情況以5%或10%的比例遞減，一般要求*針至少能把樣品在相對較短的時間內(nèi)從柱子上洗脫下來，然后再去做調(diào)整，如果開始的時候醇的比例選的過小，樣品可能在柱子上一兩個小時都洗不下來。消旋體出峰以后如果是一個峰，可以將峰放大，觀察有沒有分叉的跡象，有的話，可以通過適當(dāng)?shù)慕档痛碱惖谋壤齺磉M(jìn)一步提高分離度，如果分得太開，可以適當(dāng)?shù)奶岣叽碱惖谋壤齺砜s短分析時間，通過對流動相比例的調(diào)整，使分析時間和分離度都能滿足手性分析的要求。

　　如果樣品在使用一種醇類時沒有選擇性，即無論怎樣減小醇的比例樣品都沒有分離的跡象，可以換一種醇來試，通常乙醇和異丙醇會有不同的選擇性，很多樣品乙醇分不開，異丙醇能分離的很好。異丙醇也不行的時候可以嘗試在乙醇或者異丙醇里加入合適濃度的叔丁醇或者是甲醇，對于IC色譜柱可以嘗試其它如二氯甲烷、乙酸乙酯和甲苯等其它溶劑，每一種溶劑都能為手性分析提供獨特的選擇性，一般除了乙醇、異丙醇之外我使用zui多的還是叔丁醇，其次是甲醇，叔丁醇可以單獨和正己烷做流動相，甲醇必須結(jié)合乙醇或異丙醇混合使用。需要著重強調(diào)的是，更換醇的種類，有可能會導(dǎo)致對映異構(gòu)體出峰順序的改變，使用乙醇的流動相，如果R構(gòu)型先出峰，更換為異丙醇以后，有可能(不是一定)R構(gòu)型會后出峰，S構(gòu)型跑到前邊去了。

　　雖然提高柱溫能夠使峰形變窄變細(xì)，但是會降低分離度，而且大賽璐的手性柱溫度上限就是40度(這一點在超臨界流體色譜應(yīng)用上受限尤為明顯)，所以優(yōu)化分析方法時很少有人在柱溫上下功夫。另外手性柱分析樣品的保留時間受室溫變化的影響特別大，通常大家都習(xí)慣用消旋體圖譜計算對映異構(gòu)體相對保留時間的方法根據(jù)主峰的保留時間來計算異構(gòu)體的出峰位置。