色譜柱的柱效率是評(píng)價(jià)色譜性能的重要指標(biāo)。混合物能否在色譜柱中分離，不僅取決于選擇合適的固定相，還取決于手性色譜柱的操作條件和填充條件。

正確使用高效液相色譜柱包括：安裝保護(hù)柱、過濾流動(dòng)相和樣品、凈化樣品、避免柱壓過高、注意溫度和pH值、正確及時(shí)清洗等。

1.安裝保護(hù)柱

保護(hù)柱的作用是過濾掉來自流動(dòng)相和樣品的化學(xué)物質(zhì)“拉圾”同時(shí)，還能有效去除流動(dòng)相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動(dòng)相吸入口.進(jìn)樣閥后部及色譜柱兩端均設(shè)有1個(gè).2μm不同孔徑的濾器只能去除不溶性顆粒，不能去除化學(xué)污染。因此，有必要安裝保護(hù)柱，特別是在分析中藥時(shí).中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品是保護(hù)分析柱的重要措施。

保護(hù)柱填料應(yīng)與分析柱一致，粒徑可大于分析柱。保護(hù)柱是消耗品。經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析（50~100次）后，當(dāng)柱壓明顯升高或峰形變壞或基線漂移時(shí)，應(yīng)考慮更換保護(hù)柱。

2.過濾流動(dòng)相和樣品

流動(dòng)相通常由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成。原則上，所有通過色譜柱的流動(dòng)都應(yīng)過濾，但在實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)具體情況有所不同：當(dāng)有機(jī)溶劑使用色譜純度、石英亞沸水或其他超純水時(shí)，過濾在保證水和有機(jī)溶劑的質(zhì)量而不受污染時(shí)沒有更實(shí)際的意義。

當(dāng)流動(dòng)相中含有緩沖鹽時(shí)，需要過濾。如前所述，緩沖溶液放置一段時(shí)間后根據(jù)環(huán)境溫度不同，夏季一般不超過48h,冬季一般不超過一周)，使用前應(yīng)重新過濾。

注入流路系統(tǒng)前，樣品試液應(yīng)經(jīng)0.45μm(0.22μm最好過濾孔徑濾膜。注意區(qū)分水系和油系，兩者不能混用，防止濾膜溶解造成污染。

裝有流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器應(yīng)定期清洗和更換，以避免過載。

3.凈化樣品

樣品中含有對(duì)色譜柱有害的化學(xué)成分，如吸附蛋白質(zhì).糖和其他有機(jī)分子和強(qiáng)吸附物質(zhì)，以及可能破壞柱填料的基團(tuán)離子。樣品應(yīng)在進(jìn)樣前盡可能分離和凈化，以去除多余的雜質(zhì)成分。

4.避免柱壓過高

雖然高效液相色譜柱能承受6000 p si (磅/平方英寸)的壓力，但過高和過大的壓力變化會(huì)縮短色譜柱的使用壽命，避免的方法是避免色譜柱的使用壽命

(1)柱壓過高時(shí)，盡量采用較小的流速，以免超過柱最大允許壓力的一半。

(2)當(dāng)流速較大時(shí)，應(yīng)采用流速梯度的方法使流速分步到位。

(3)使用手動(dòng)進(jìn)樣閥時(shí)，進(jìn)樣閥的切換應(yīng)盡可能快。否則，超過20%的壓力沖擊很快就會(huì)使柱子報(bào)廢。使用多柱共用時(shí)，應(yīng)避免在高壓下進(jìn)行柱切換。

5.注意溫度和酸堿度

硅膠色譜柱的最高使用溫度一般不超過60℃,以低于40℃特別是在流動(dòng)相動(dòng)相pH接近使用限度時(shí)，應(yīng)降低使用溫度。

過高的溫度會(huì)加速鍵合相的水解和硅膠的溶解，從而改變填料的性質(zhì)，使柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。

目前鍵合硅膠色譜柱標(biāo)注pH適用范圍可達(dá)2~10，但在實(shí)際使用中應(yīng)避免pH條件，特別是堿性條件，特別是堿性條件(pH≥8)下使用，如必須在下使用，pH在條件下使用時(shí)，可避免柱損傷：

(1)在泵與進(jìn)樣閥之間安裝預(yù)柱(飽和柱)來飽和流動(dòng)相

(2)降低使用溫度

(3)檢查結(jié)束后，立即使用與使用的流動(dòng)相互混溶的流動(dòng)“溫和溶劑”清洗。

6.正確及時(shí)的沖洗

在開始測(cè)試之前，你應(yīng)該知道柱子中目前是什么樣的溶劑。對(duì)于新的色譜柱，如果沒有特殊的說明，則是評(píng)估報(bào)告中使用的流動(dòng)相。柱中當(dāng)前的溶劑必須與分析樣品中使用的流動(dòng)相互溶解。如果不能混合，則應(yīng)使用第三種溶劑與兩者混合。